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实验技术交流

荧光定量PCR(Real Time PCR)原理及用途

文字:[大][中][小] 手机页面二维码 2019/5/8     浏览次数:    

本文主要介绍荧光定量PCR(Real Time PCR的基本概念以及原理和一些常见的用途,让您能大致了解荧光定量PCR是什么,荧光定量PCR检测什么。

Real Time PCR:荧光定量PCR,也是通常称呼的实时荧光定量PCR,是一种使用Real Time PCR扩增装置实时监测PCR扩增产物并进行分析的方法。

Real Time PCR实验示意图同一个样品重复96次的PCR扩增曲线

左边为Real Time PCR实验示意图,右边为同一个样品重复96次的PCR扩增曲线图


在理解Real Time PCR原理之前,先介绍两个基本概念。

阈值:在扩增曲线的指数增长区域内适当位置上设定的荧光检出界限。

Ct值概念:Real Time PCR扩增过程中,每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数。( C-代表Cyclet-代表threshold

Real Time PCR原理:PCR反应体系中加入荧光物质,并实时监测荧光信号积累的整个PCR进程,最后通过已知浓度的标准品制作的标准曲线对未知浓度的样品进行定量分析。

Real Time PCR 用途

Real Time PCR可以检测什么?

定性分析:病毒和病原菌检测、生物品种鉴定、SNPSNP解析等。

绝对定量:病毒和病原菌定量分析、导入基因拷贝数解析、GMOGMO定量检测等。

相对定量:差异显示结果验证、基因芯片结果验证、siRNA效果确认、mRNA表达量分析等。

使用Real Time PCR的优势在于:操作简单,无需电泳,检测快速,降低污染几率;适用于大量样品检测,检测灵敏度高;可以在宽广范围内进行准确定量。

相关实验教程:Real Time PCR引物设计原则


阈值和Ct值

阈值和Ct值

荧光信号强度扩增曲线荧光定量PCR扩增曲线

荧光定量PCR标准曲线

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